Técnicas de criopreservación existentes

Existen métodos de congelación LENTA y RAPIDA.

Para aplicar los métodos lentos se requiere un congelador programable mediante un programa informático, capaz de realizar un descenso lento, gradual y muy controlado de la temperatura, hasta alcanzar la deseada de acuerdo al protocolo de ejecución (-30º centígrados ó - 80º centígrados comúnmente). Los crioprotectores más utilizados en estos casos son el dimetilsulfóxido (DMSO), propanendiol (PROH) y el glicerol.

El papel que desarrollan los crioprotectores en los métodos de congelación es el de proteger los materiales biológicos del daño causado por la formación de cristales intracelulares y las altas concentraciones de solutos necesarias para su criopreservación. El modo de acción de los crioprotectores es muy complejo; su efecto protector proviene de su habilidad para vincularse al agua, de su capacidad para reducir los efectos tóxicos de las altas concentraciones de sales y de solutos y de ser los causantes de que el agua intracelular forme cristales de hielo que pueden dañar las organelas intracitoplásmicas.

Los métodos rápidos incluyen la vitrificación y la congelación ultrarápida:

· Técnica de vitrificación
Consiste en la utilización de una solución altamente viscosa que, al ser enfriada, aumenta su viscosidad hasta alcanzar la consistencia de un vidrio.
Ventaja: no se producen daños celulares causados por la formación de cristales de hielo extracelulares.
(De todas las maneras, no hay que olvidar que las altas concentraciones de crioprotectores utilizados en la vitrificación son tóxicas para los embriones y por tanto se desaconseja su utilización en congelación de embriones humanos)

· Métodos ultrarápidos
Utilizan bajas concentraciones de crioprotectores y normalmente los containers de los embriones a criopreservar, son sumergidas directamente en Nitrógeno líquido partiendo de 0 grados centígrados en una primera fase en la que se “ vaporizan “ con Nitrógeno líquido ( sus vapores) antes de la inmersión.

¿ En qué fase celular normalmente se utiliza la criopreservación ?.
A- Congelación lenta con dimetilsulfóxido (DMSO). Con este protocolo, los mejores resultados se obtienen congelando embriones en estadio de 4-8 células. Los primeros niños nacidos en el mundo fruto de la congelación ó criopreservación embrionaria, se obtuvieron con este protocolo y con el medio crioprotector aludido.
B- Congelación lenta con PROH (1-2 propanendiol ). Los mejores resultados con esta técnica se obtinen congelando embriones en estadios muy precoces ( 2 pronúcleos-2 PN-, estadio de 2 células y de 4 células ). La mayor tasa de supervivencia tras la congelación-descongelación, se consigue en el estadio de 2PN en cuyo caso se alcanza hasta un 70% de supervivencia; cuando se utiliza para congelar embriones ya divididos, se recomienda que los blastómeros del embrión tengan todos ellos núcleo.
Este protocolo es el más sencillo y el más rápido a desarrollar en comparación con los protocolos lentos y también son mejores sus resultados en cuanto a tasa de supervivencia y tasa de implantación y subsiguiente embarazo posterior.
C- Congelación lenta con Glicerol. Sólo se usa para la congelación de blastocistos ( que es un estadio de la división embrionaria que sucede a partir del 5º - 6º día después de la fertilización).
D- Método ultrarápido. Los embriones congelados en 2 PN son los que mejor resisten el proceso de congelación-descongelación con una tasa de supervivencia aproximada del 70%. También es importante destacar que los embriones en 2 y 4 células resisten mejor que los embriones congelados en estadios intermedios como 3 y 5 células.

La transferencia se realiza normalmente entre el 2º-3º-4º día después de la fertilización. Esperar mas días (cercanos a 14) a contar desde la fecundación para la transferencia es causa de que la inmensa mayoría de los embriones humanos mueran in vitro si se espera mucho tiempo (degeneran, se fragmentan).

Cuanto más avanzado sea el periodo de cultivo “In Vitro” del embrión, y por lo tanto, cuanto más cerca estemos del desarrollo del blastocisto expandido (hacia el 6º - 8º día desde la fertilización), mayor es la tasa de implantación y más seguro el embarazo.

¿ Qué técnica de criopreservación es la más aconsejable ?
La mayoría de los grupos en el Estado Español usa la congelación “ lenta “

http://www.neyro.com/crio.html


Además de la criopreservación de embriones y pronúcleos, también existe la posibilidad de congelar espermios, óvulos y tejido ovárico. El congelamiento de óvulos aún está en fase experimental y ha tenido una baja probabilidad de éxito (3%). Si bien los espermios y embriones se congelan en forma bastante fácil, los óvulos son mucho más frágiles, contienen mucha agua y cuesta más deshidratarlos para congelarlos. Eso mismo puede dañar su estructura. En el caso de tejido ovárico, los médicos aún no logran consenso respecto a si conserva la fertilidad de una mujer.

El objetivo es fertilizar in vitro una limitada cantidad de óvulos y luego transferir al útero sólo un par de embriones, dejando el resto almacenados a temperaturas de menos 160 grados Celsius. También se puede transferir un solo embrión. Así, si la mujer se embaraza lo hace de un único bebé, aunque le implique más tiempo. En ningún caso (Chile) se recurre a la eliminación de embriones, como ha ocurrido en otras naciones. Las parejas pueden donar los embriones que no utilizarán a otras parejas infértiles.

Ventajas y costos

La criopreservación de pronúcleos permite mantener la tasa de embarazos globales y disminuir los partos múltiples, ya que se transfieren menos embrionesOtra de las ventajas es que también se abaratan costos, ya que basta con realizar una sola estimulación ovárica -la parte más cara de los programas de fertilización, no menor al millón y medio de pesos-, y luego congelar pronúcleos o embriones para futuros procedimientos. "En promedio, la criopreservación cuesta $80 mil, más unos $8 mil por mantención mensual. Cada transferencia de embriones cuesta unos $120 mil. Incluso, a través de Fonasa existe un programa que incluye criopreservación gratuita para parejas de escasos recursos.

http://www.puntomujer.emol.com/super_mama/noticia/detallenoticia.asp?id=%7B2FB765E9-D63E-4B14-9704-CA5FD082F71B%7D